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      做微生物培养实验新手入门指南!

      提供者:上海远慕生物科技有限公司   发布时间:2022/8/9 13:22:15  阅读次数:15次   进入该公司店铺

       微生物的生长,除了受本身的遗传特性决定外,还受到许多外界因素的影响,如营养物浓度、温度、水分、氧气、pH等。微生物的种类不同,培养的方式和条件也不尽相同。

      影响微生物生长的因素很多,简要介绍如下:
       
      (1)水分
      水分是微生物实验室培养中进行生长的必要条件。芽孢、孢子萌发,先需要水分。
      微生物是不能脱离水而生存的。但是微生物只能在水溶液中生长,而不能生活在纯水中。各种微生物在不能生长发育的水分活性范Χ内,均具有狭小的适当的水分活性区域。
       
      (2)温度
      在一定的温度范Χ内,种微生物都有自已的生长温度三基点:
      -低生长温度
      适生长温度
      -高生长温度
      在生长温度三基点内,微生物都能生长,但生长速率不一样。微生物只有处于适生长温度时,生长速度才快,用时短。超过-低或-高生长温度,微生物不会生长,甚至会死亡。
       
      一般情况下,微生物的生长温度三基点是恒定的。但也常受其它环境条件的影响而发生变化。根据微生物适生长温度的不同,可将它们分为三个类型:
      a.嗜冷微生物:其适生长温度多数在-10℃-20℃之间
      b.中温微生物:其适生长温度一般在20℃-45℃之间
      c.嗜热微生物:生长温度在45℃以上。
       
      (3)营养物浓度
      细菌的生长率与营养物的浓度有关:μ=μmax*C/(K+C) ,营养物浓度与生长率的关系曲线是典型的双曲线。
      K值是细菌生长的很基本的特性常数。它的数值很小,表明细菌所需要的营养浓度非常之低。
      然而营养太低时,细菌生长就会遇到困难,甚至还会死亡。这是因为除了生长需要能量以外,细菌还需要能量来维持它的生存。这种能量称为维持能。
       
      (4)氧气
      按照微生物对氧气的需要情况,可将它们分为以下五个类型。
      a. 需氧微生物:这类微生物需要氧气供呼吸之用,有氧气,便不能生长。但是高浓度的氧气对需氧微生物也是有毒的,很多需氧微生物不能在氧气浓度大于大气中氧气浓度的条件下生长。绝大多数微生物都属于这个类型。
      b. 兼性需氧微生物:这类微生物在有氧气存在或无氧气存在情况下,都能生长,只不过所进行的代谢途径不同罢了。在无氧气存在的条件下,它进行发酵作用,例如酵母菌的无氧乙醇发酵。
      c. 微量需氧微生物:这类菌是需要氧气的,但只在0.2大气压下生长-好。这可能是由一它们含有在强氧化条件下失活的,因而只有在低压下作用。
      d. 耐氧微生物:这类微生物在生长过程中,不需要氧气,但也不怕氧气存在,不会被氧气所杀死。
      e. 厌氧微生物:这类微生物在生长过程中,不需要分子氧。分子氧存在对它们生长产生毒害,不是被抑制,就是被杀死。
       
      实验室微生物培养方法
       
      根据培养时是否需要氧气,可分为好氧培养和厌氧培养两大类。
      (1)好氧培养:也称“好气培养”。这种微生物在培养时,需要有氧气加入,否则就不能生长良好。
      在实验室中,斜面培养是通过棉花塞从外界获得无菌的空气。
      三角烧瓶液体培养多数是通过摇床振荡,使外界的空气源源不断地进入瓶中。
       
      (2)厌氧培养:也称“厌气培养”。这类微生物在培养时,不需要氧气参加。在厌氧微生物的培养过程中,重要的一点就是要除去培养基中的氧气。
      一般可采用下列几种方法:
      a.降低培养基中的氧化还原电λ:常将还原剂如谷胱甘肽、硫基醋酸盐等,加入到培养基中,便可达到目的。有的将一些动物的死的或活的组织如牛心、羊脑加入到培养基中,也可适合厌氧菌的生长。
      b.化合去氧:这也有很多方法,主要有:用焦性食子酸吸收氧气;用磷吸收氧气;用好氧菌与厌氧混合培养吸收氧气;用植物组织如发芽的种子吸收氧气;用产生氢气与氧化合的方法除氧。
      c.隔绝阻氧:深层液体培养;用石蜡油封存;半固体穿刺培养。
      d.替代驱氧:用二氧气碳驱代氧气;用氮气驱代氧气;用真空驱代氧气;用氢气驱代氧气;用混和气体驱代氧气。
       
      根据培养基的物理状态,可分为固体培养和液体培养两大类。
      (1)固质培养:是将菌种接至疏松而富有营养的固体培养基中,在合适的条件下进行微生物培养的方法。
      (2)液体培养:在实验中,通过液体培养可以使微生物迅速繁殖,获得大量的培养物,在一定条件下,还是微生物选择增菌的有效方法。
       
      微生物实验室常用菌种保藏法
       
      菌种的保藏常采用干燥、低温和隔绝空气等措施,将其新陈代谢限制在-低范Χ内,使其生命活动处于半永-久性的休眠状态,使菌种能够存活、不污染杂菌、不发生或较少发生变异,保存菌种原有的各种生物学性状。较常用的菌种保藏法有斜面或半固体传代保藏法,以及冷冻真空干燥法和液氮超低温保藏法。
       
      1. 斜面或半固体传代保藏法
      此法保藏菌种常用的培养基有普通肉汤琼脂斜面、血清斜面、血琼脂斜面、鸡蛋斜面和血清肉汤半固体培养基等等。
      在斜面或半固体培养基表面,往往加入灭菌液体石蜡,用以隔绝空气。此外,厌氧菌的传代保藏则常采用疮肉基。
       
      2. 冷冻真空干燥法
      将加入一定保护剂(如无菌脱脂牛奶)的菌种悬液冷冻,然后在冻结状态下经过真空干燥,使菌种处于半永-久性的休眠状态,从而达到长-久保藏的目的。一般可保藏数年甚至数十年之久。该法需要特殊的低温干燥设备。
       
      3. 液氮超低温保藏法
      将保藏的菌种分散在保护剂中(如甘油、二甲亚枫、蔗糖和吐温80等),或将平板上生长良好的培养物打块,原封不动地置于保护剂中,预冻后保藏在液氮超低温(-196℃)中。该法是目较理想的菌种保藏方法,可较长-期保藏菌种。
       

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